亦称传代培养保藏法，包括斜面培养、穿刺培养、液体培养等。是指将菌种接种于适宜的培养基中，条件下培养，待生长充分后，于4～6℃进行保存并间隔一定时间进行移植培养的菌种保藏方法。

　　操作步骤如下：

　　培养基制备

　　1、器皿准备

　　培养基制备过程中所用的一些玻璃器皿，如，三角瓶、试管、培养皿、烧杯、吸管等，经洗涤、干燥、包装、灭菌后使用。

　　2、溶解培养基配料

　　先在烧杯中放适量水，按培养基配方称取各项材料，依次将缓冲化合物、主要元素、微量元素、维生素等材料加入水中溶解，加足水量，搅拌均匀。

　　3、调pH值

　　配料溶解后将培养基冷却至室温，根据要求加稀酸（0.1mol/L盐酸）或稀碱(10%氢氧化钠)调pH值。加酸或碱液时要缓慢、少量、多次搅拌，防止局部过碱或过酸而导致测量不准确和营养成分被破坏。

　　4、加凝固剂

　　配制固体培养基时需加凝固剂，如，琼脂、明胶等。将凝固剂加入液体培养基中，加热并不断搅拌至融解，再补足所蒸发水分。

　　5、过滤分装

　　在二层纱布中间夹入脱脂棉，将配好的培养基趁热过滤并分装。斜面培养基分装量约为试管高度的四分之一(4～5mL)，穿刺培养基分装量以试管高度的二分之一为宜。分装过程中勿使培养基沾污管口，以免弄湿棉塞造成污染。

　　6、包扎标记

　　将试管加棉塞，外面包扎一层牛皮纸或铝箔并注明培养基名称及配制日期。

　　7、灭菌

　　根据要求将培养基灭菌，通常蒸汽灭菌为121℃，15～20min。

　　8、斜面摆放

　　灭菌后及时摆放斜面，斜面长度不超过试管管长的二分之一为宜。

　　9、无菌检查

　　将灭菌的培养基放入培养箱中作无菌检验，通常30℃培养1～3天。无菌检查合格后将其保存于4℃下备用。