一、范围

　　本方法规定了动物源细菌（大肠杆菌、沙门氏菌、肠球菌、金黄色葡萄球菌、副猪嗜血杆菌、魏氏梭菌和伪结核棒状杆菌）药敏检测试剂盒的操作方法。

　　二、材料

　　除微生物实验室常规灭菌设备外，其他设备和材料如下：

　　2.1 恒温培养箱35±2℃

　　2.2 生物安全柜

　　2.3 浊度计或者标准比浊管

　　2.3 微量加样器1uL~1000uL

　　2.4 吸头（与微量加样器匹配）

　　三、操作步骤

　　取出试剂盒，打开包装待用。

　　菌液制备

　　将无菌棉签用生理盐水润湿后，直接取过夜培养皿上数个新鲜菌落，与适量无菌生理盐水混匀。然后，用标准比浊管或者浊度计校正菌液浓度至0.5麦氏单位（1~2×108CFU/mL）。用试剂盒中的肉汤按照使用说明书要求的倍数稀释，混匀备用。

　　菌液接种

　　除空白对照外，其余的95孔加入制备好（用前要混匀）的菌液100?L

　　空白对照孔中加入100?L无菌肉汤。盖好板盖并记录菌号。

　　孵育

　　将检测板置于35℃±2℃很稳培养箱中孵育16~18小时。

　　观察结果

　　在衬有黑底板的光线下，用肉眼观察。

　　先观察阴性对照孔和阳性对照孔：阴性对照孔应无细菌生长，孔内液体未见浑浊；阳性对照孔内应有细菌生长所形成的圆形或者网状沉淀。

　　如果阴性和阳性对照结果正常，继续观察其余孔内细菌生长情况，在无细菌生长的孔内所含低抗菌药物浓度即为低抑菌浓度（MIC）。

　　四、结果记录

　　将MIC结果记录在敏感性检测结果统计表中。

　　敏感性检测结果统计表

　　（1）G-菌（大肠杆菌、沙门氏菌和副猪嗜血杆菌）MIC

　　注：直接填写检测的MIC数值。

　　（2）G+菌（肠球菌、金黄色葡萄球菌和伪结核棒状杆菌）MIC

　　注：直接填写检测的MIC数值。

　　（3）弯曲杆菌MIC

　　注：直接填写检测的MIC数值。

　　（4）肠球菌和魏氏梭菌MIC（促生长抗菌药物监测）

　　注：直接填写检测的MIC数值。